مجموعة أدوات PCR لفيروس جدري القرود في الوقت الحقيقي
تفاصيل المنتج
الاستخدام المقصود
يتم استخدامه للكشف عن فيروس جدري القرود في مصل الدم البشري أو عينات إفرازات الآفة باستخدام أنظمة PCR في الوقت الحقيقي.
مبدأ الاختبار
هذا المنتج عبارة عن نظام مقايسة PCR في الوقت الفعلي قائم على مسبار Taqman® الفلوري.تم تصميم بادئات وتحقيقات محددة للكشف عن جين F3L الخاص بفيروس جدري القرود.تقوم المراقبة الداخلية التي تستهدف الجينات البشرية المحفوظة بمراقبة جمع العينات والتعامل معها وعملية تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الفعلي لتجنب النتائج السلبية الكاذبة.المجموعة عبارة عن نظام مُجفف بالتجميد مُسبق الخلط بالكامل، والذي يشتمل على المواد اللازمة للكشف عن فيروس جدري القرود: إنزيم تضخيم الحمض النووي، وإنزيم UDG، ومخزن التفاعل، ومبدئ محدد ومسبار.
المحتويات الرئيسية
يتم سرد المكونات المقدمة في الجدول.
| عناصر | طَرد | المكونات |
| فيروس جدري القرودبريمكس مجفف بالتجميد | 8 أنابيب PCR الشريطية× 6 أكياس | الاشعال، المجسات، مزيج dNTP/dUTP، Mg2+، بوليميريز الحمض النووي Taq، إنزيم UDG |
| مراقبة إيجابية MPV | 400 ميكرولتر × 1 أنبوب | تسلسل الحمض النووي الذي يحتوي على الجين المستهدف |
| التحكم السلبي MPV | 400 ميكرولتر × 1 أنبوب | تسلسل الحمض النووي الذي يحتوي على قطعة الجينات البشرية |
| حل الذوبان | 1 مل × 1 أنبوب | مثبت |
| شهادة المطابقة | 1 قطعة | / |
تدفق العملية
1. العينةمجموعة:وينبغي جمع العينة في أنابيب معقمة وفقا لذلك
بالمواصفات الفنية القياسية.
2. إعداد الكاشف (منطقة إعداد الكاشف)
أخرج مكونات المجموعة، وقم بموازنتها في درجة حرارة الغرفة للاستخدام في وضع الاستعداد.
3. معالجة العينات (منطقة معالجة العينات)
3.1 استخراج الحمض النووي
يوصى بأخذ عينات سائلة بحجم 200 ميكرولتر، والتحكم الإيجابي والتحكم السلبي لاستخراج الحمض النووي، وفقًا للمتطلبات والإجراءات المقابلة لمجموعات استخراج الحمض النووي الفيروسي.
3.2 إذابة المسحوق المجفف بالتجميد وإضافة القالب
إعداد خليط مجفف بالتجميد من فيروس جدري القرود وفقا لعدد العينات.تحتاج عينة واحدة إلى أنبوب PCR واحد يحتوي على مسحوق بريمكس مجفف بالتجميد.يجب التعامل مع التحكم السلبي والتحكم الإيجابي كعينتين.
(1) أضف 15 ميكرولتر من محلول الذوبان في كل أنبوب PCR يحتوي على مزيج مسبق مجفف بالتجميد، ثم أضف 5 ميكرولتر من العينات المستخرجة / التحكم السلبي / التحكم الإيجابي في كل أنبوب PCR على التوالي.
(2) قم بتغطية أنابيب PCR بإحكام، ثم قم بتمرير أنابيب PCR يدويًا حتى يذوب المسحوق المجفف بالتجميد تمامًا ويمزج، ثم اجمع السائل إلى قاع أنابيب PCR عن طريق الطرد المركزي الفوري منخفض السرعة.
(3) في حالة استخدام أداة PCR مشتركة في الوقت الحقيقي للكشف، قم بنقل أنابيب PCR مباشرة إلى منطقة التضخيم؛إذا كنت تستخدم BTK-8 للكشف، فأنت بحاجة إلى تنفيذ العمليات التالية: نقل 10 ميكرولتر من السائل من أنبوب PCR إلى رقاقة التفاعل بشكل جيد BTK-8.يتوافق أنبوب PCR واحد مع بئر واحد على الرقاقة.أثناء عملية بيبيتينج، تأكد من أن الماصة عمودية 90 درجة.يجب وضع نصائح ماصة حاجز الهباء الجوي في وسط البئر بقوة معتدلة والتوقف عن دفع الماصة عندما تصل إلى الترس الأول (لتجنب الفقاعات).بعد ملء الآبار، أخرج غشاء رقاقة التفاعل لتغطية جميع الآبار ثم يتم نقل الرقاقة إلى منطقة الكشف عن التضخيم.
4. تضخيم PCR (منطقة الكشف)
4.1 ضع أنابيب PCR/شريحة التفاعل في خزان التفاعل وقم بتعيين أسماء كل تفاعل جيدًا بالترتيب المقابل.
4.2 إعدادات الكشف عن مضان: (1) فيروس جدري القرود (FAM)؛(2) الرقابة الداخلية (CY5).
4.3 قم بتشغيل بروتوكول ركوب الدراجات التالي
بروتوكول ABI7500، Bio-Rad CFX96، SLAN-96S، QuantStudio:
| خطوات | درجة حرارة | وقت | دورات | |
| 1 | ما قبل تمسخ الطبيعة | 95 درجة مئوية | 2 دقيقة | 1 |
| 2 | تمسخ | 95 درجة مئوية | 10 ثانية | 45 |
| الصلب، والإرشاد، واكتساب مضان | 60 درجة مئوية | 30 ثانية | ||
بروتوكول BTK-8:
| خطوات | درجة حرارة | وقت | دورات | |
| 1 | ما قبل تمسخ الطبيعة | 95 درجة مئوية | 2 دقيقة | 1 |
| 2 | تمسخ | 95 درجة مئوية | 5 ثانية | 45 |
| الصلب، والإرشاد، واكتساب مضان | 60 درجة مئوية | 14 ثانية | ||
5. تحليل النتائج (يرجى الرجوع إلى دليل مستخدم الأداة)
بعد رد الفعل، سيتم حفظ النتائج تلقائيا.انقر فوق "تحليل" للتحليل، وسوف يقوم الجهاز تلقائيًا بتفسير قيم Ct لكل عينة في عمود النتيجة.يجب أن تتوافق نتائج المراقبة السلبية والإيجابية مع ما يلي "6. مراقبة الجودة".
6. رقابة جودة
6.1 التحكم السلبي: لا يوجد Ct أو Ct> 40 في قناة FAM، Ct ≥40 في قناة CY5 مع منحنى التضخيم الطبيعي.
6.2 التحكم الإيجابي: Ct ≥35 في قناة FAM مع منحنى التضخيم الطبيعي، Ct ≥40 في قناة CY5 مع منحنى التضخيم الطبيعي.
6.3 تكون النتيجة صالحة إذا تم استيفاء جميع المعايير المذكورة أعلاه.وإلا فالنتيجة باطلة.
تفسير النتيجة
النتائج التالية ممكنة:
| قيمة Ct لقناة FAM | قيمة Ct لقناة CY5 | تفسير | |
| 1# | لا يوجد Ct أو Ct> 40 | ≥40 | فيروس جدري القرود سلبي |
| 2# | ≥40 | أي نتائج | فيروس جدري القرود إيجابي |
| 3# | 40~45 | ≥40 | إعادة الاختبار؛إذا كان لا يزال 40 ~ 45، قم بالإبلاغ كـ 1 # |
| 4# | لا يوجد Ct أو Ct> 40 | لا يوجد Ct أو Ct> 40 | غير صالح |
ملحوظة: في حالة ظهور نتيجة غير صحيحة، يجب جمع العينة واختبارها مرة أخرى.
معلومات الطلب
| اسم المنتج | قطة.لا | مقاس | عينة | مدة الصلاحية | عبر.& ستو.درجة حرارة. |
| مجموعة أدوات PCR لفيروس جدري القرود في الوقت الحقيقي | B001P-01 | 48 اختبارًا/مجموعة | المصل / الإفرازات الآفة | 12 شهر | -25～-15 درجة مئوية |
